Phần 1: Tác Dụng Của Đậu Faba (Vicia faba L.) Đối Với Cấu Trúc Cơ Và Các Chỉ Dấu Sinh Học Của Xơ Hóa Ở Cá Rô Phi (Oreochromis niloticus)

Tóm tắt

Cá rô phi (Oreochromis niloticus) có thịt giòn là một loại cá có giá trị, nổi bật với độ cứng và độ dai của cơ cao, được tạo ra thông qua việc sử dụng đậu faba (Vicia faba L.) trong khẩu phần ăn. Phản ứng căng thẳng do các gốc oxy hoạt tính (ROS) có thể là một trong những nguyên nhân sinh lý dẫn đến sự thay đổi về độ giòn của kết cấu cơ. Tuy nhiên, cơ chế phân tử kiểm soát kết cấu cơ ở cá, đặc biệt là những cơ chế liên quan đến việc bổ sung đậu faba trong khẩu phần ăn, vẫn chưa được làm rõ. Trong nghiên cứu này, cá rô phi được chia thành hai nhóm và cho ăn trong 80 ngày: một nhóm sử dụng khẩu phần có đậu faba và nhóm còn lại sử dụng thức ăn công thức thương mại không chứa đậu faba. Sau thời gian thí nghiệm, các mẫu cá được phân tích về kết cấu cơ, cấu trúc vi mô, hàm lượng collagen và transcriptome nhằm xác định cơ chế hình thành kết cấu cơ giòn. Kết quả cho thấy các chỉ số về kết cấu cơ, bao gồm độ cứng, độ đàn hồi, độ dẻo và độ dai, đều tăng ở nhóm cá được cho ăn đậu faba. Đồng thời, đường kính sợi cơ giảm khi mật độ sợi cơ tăng, trong khi tổng hàm lượng collagen trong chất nền ngoại bào của cơ tăng đáng kể. Bên cạnh đó, sự biểu hiện của các gen liên quan đến quá trình xơ hóa, gồm col1α1, versican, comp và fibrosin, tăng đáng kể ở nhóm cá được cho ăn đậu faba. Ngược lại, sự biểu hiện của decorin – một chất được biết đến với tác dụng ức chế quá trình xơ hóa – lại giảm ở nhóm cá này. Nhìn chung, nghiên cứu cho thấy việc cho cá rô phi ăn đậu faba có thể làm thay đổi chất lượng kết cấu cơ thông qua những biến đổi về đặc điểm sợi cơ và hàm lượng collagen. Nghiên cứu cũng xác định được các gen liên quan đến những thay đổi trong quá trình xơ hóa cơ, qua đó góp phần lý giải sự cải thiện chất lượng kết cấu ở cá rô phi có thịt giòn. Những kết quả này cung cấp cơ sở lý thuyết cho việc điều chỉnh và nâng cao sản lượng cá rô phi có thịt giòn.

1. Giới thiệu

Cá rô phi (Oreochromis niloticus) được Tổ chức Lương thực và Nông nghiệp Liên Hợp Quốc (FAO) khuyến nghị là một trong những loài thủy sản quan trọng nhờ tốc độ tăng trưởng nhanh, khả năng sinh sản tốt, dễ nuôi và có hàm lượng protein cao (FAO, 1976). Hiện nay, cá rô phi đã được nuôi phổ biến tại nhiều quốc gia và khu vực, với sản lượng đạt 6,9 × 10¹⁰ kg trong những năm gần đây (FAO, 2020). Nhiều nghiên cứu cho thấy, việc bổ sung đậu faba vào khẩu phần ăn của một số loài cá trong thời gian từ 60 đến 120 ngày có thể làm tăng mật độ sợi cơ và hàm lượng collagen, đồng thời làm giảm đường kính sợi cơ và hàm lượng lipid thô. Những thay đổi này góp phần làm tăng đáng kể độ cứng và độ dai của cơ, từ đó tạo nên kết cấu thịt giòn đặc trưng (He et al., 2023; Song et al., 2020; Wang et al., 2023b; Xu et al., 2020). Cá giòn ngày càng phổ biến tại Trung Quốc và nhiều quốc gia khác nhờ chất lượng thịt đặc biệt. Vì vậy, sử dụng đậu faba trong khẩu phần ăn của cá rô phi nhằm cải thiện chất lượng cơ là một hướng tiếp cận hiệu quả, góp phần nâng cao giá trị kinh tế của sản phẩm.

Nhiều nghiên cứu đã đánh giá những thay đổi về hiệu suất tăng trưởng, thành phần dinh dưỡng, các phản ứng sinh lý và sinh hóa, hoạt tính của enzyme tiêu hóa cũng như chất lượng cơ ở cá rô phi (Li et al., 2023) và cá chép cỏ (Ctenopharyngodon idellus) (Yu et al., 2017a) khi được cho ăn thức ăn giòn. Phản ứng của cơ thể đối với các loại oxy hoạt tính (ROS) được xem là một trong những cơ chế sinh lý có thể liên quan đến sự hình thành đặc tính cơ giòn. ROS, bao gồm anion superoxide (O₂⁻), hydrogen peroxide (H₂O₂) và gốc hydroxyl (OH⁻), có thể tác động đáng kể đến quá trình biệt hóa sợi cơ, thể hiện qua những thay đổi về mật độ và đường kính sợi cơ, đồng thời ảnh hưởng đến quá trình lắng đọng collagen. Kết quả phân tích proteomic trên cá chép cỏ được cho ăn thức ăn giòn cho thấy sự tích tụ ROS có thể làm giảm độ nhạy cảm của sợi cơ đối với Ca²⁺. Sự thay đổi này tiếp tục làm gián đoạn tương tác giữa actin và myosin, từ đó dẫn đến giảm đường kính sợi cơ và gia tăng độ cứng của cơ (Yu et al., 2020). Bên cạnh đó, ROS có thể ảnh hưởng đến quá trình tái tạo collagen, làm tăng hàm lượng collagen trong mô cơ và góp phần làm gia tăng độ cứng của cơ (Yu et al., 2020). Các nghiên cứu trên cá chép cỏ cũng cho thấy ROS có thể được vận chuyển từ ruột và gan đến mô cơ thông qua hệ tuần hoàn máu. Trong quá trình cho ăn, ROS tiếp tục tích tụ trong mô cơ, từ đó có khả năng tác động đến cấu trúc và chất lượng cơ của cá (Chen et al., 2021).

Tuy nhiên, cơ chế phân tử liên quan đến hiện tượng giòn cơ ở cá khi sử dụng khẩu phần có đậu faba khá phức tạp. Một số nghiên cứu đã bước đầu làm sáng tỏ các cơ chế phân tử điều hòa những thay đổi trong quá trình biệt hóa sợi cơ, qua đó góp phần hình thành đặc tính giòn của cơ cá. Ở cá được cho ăn đậu faba, sự gia tăng biểu hiện của các gen liên quan đến con đường Hippo thúc đẩy sự gia tăng số lượng sợi cơ ở cá chép cỏ (Xu et al., 2020). Sự gia tăng số lượng sợi cơ này kích thích quá trình tăng sinh cơ, từ đó làm thay đổi đặc tính kết cấu của cơ cá (Wei et al., 2022). Bên cạnh đó, sự giảm biểu hiện của chuỗi nặng myosin và chuỗi nhẹ myosin góp phần làm giảm đường kính sợi cơ. Đồng thời, sự gia tăng biểu hiện của catenin và talin thúc đẩy quá trình tăng sinh sợi cơ, qua đó làm tăng mật độ sợi cơ (Yu et al., 2017b).

Sự tích lũy collagen là một đặc điểm kiểu hình quan trọng khác được ghi nhận trong quá trình làm săn chắc cơ (Wang et al., 2023b). Collagen có ảnh hưởng đáng kể đến độ cứng của cơ, phụ thuộc vào hàm lượng và mức độ ổn định của collagen (Csapo et al., 2020). Các nghiên cứu cho thấy sự gia tăng độ cứng của cơ có mối tương quan tích cực với mức độ biểu hiện của collagen loại I (Peng et al., 2022). Ngoài ra, sự biểu hiện quá mức của Smad4 có thể làm tăng hàm lượng mRNA và protein của collagen loại I (Yu et al., 2019). Xơ hóa có thể xảy ra ở nhiều cơ quan khác nhau và được đặc trưng bởi sự tích tụ quá mức các thành phần của chất nền ngoại bào (ECM), bao gồm collagen và fibronectin (Antar et al., 2023). Do đó, cần tiếp tục nghiên cứu để xác định liệu quá trình xơ hóa cơ có xảy ra trong quá trình làm săn chắc cơ hay không, đồng thời làm rõ các gen liên quan đến quá trình này.

Chúng tôi giả thuyết rằng việc sử dụng đậu faba trong khẩu phần ăn của cá rô phi có thể kích thích quá trình xơ hóa cơ và các con đường tái cấu trúc chất nền ngoại bào (ECM), qua đó ảnh hưởng đến chất lượng kết cấu của cơ. Để xác định các gen ứng cử viên chủ chốt, đặc biệt là những gen liên quan đến quá trình xơ hóa và chuyển hóa ECM, đồng thời làm rõ vai trò điều hòa của chúng trong sự hình thành kết cấu cơ giòn, nghiên cứu đã đánh giá hiệu suất tăng trưởng, đặc điểm kết cấu cơ, cấu trúc vi mô của sợi cơ và hàm lượng collagen ở cá rô phi sau 80 ngày được cho ăn khẩu phần chứa đậu faba. Bên cạnh đó, phân tích transcriptome và phản ứng chuỗi polymerase định lượng phiên mã ngược (RT-qPCR) được thực hiện nhằm đánh giá mức độ biểu hiện của các gen liên quan. Ngoài ra, tỷ lệ đậu faba khác nhau trong khẩu phần có thể tạo ra những tác động khác nhau đối với cá. Trong nghiên cứu này, cá được cho ăn khẩu phần chứa 100% đậu faba. Do đó, các kết quả quan sát được có thể khác với những nghiên cứu trước đây, trong đó đậu faba chỉ được bổ sung vào khẩu phần ở một tỷ lệ nhất định.

2. Vật liệu và phương pháp

2.1. Tuyên bố đạo đức

Nghiên cứu này đã được Ủy ban Đạo đức Thí nghiệm Động vật của Đại học Hải dương Thượng Hải (Thượng Hải, Trung Quốc) phê duyệt (SHOU-DW-2016-004).

2.2. Cá và điều kiện thí nghiệm

Cá rô phi sử dụng trong thí nghiệm được cung cấp từ trang trại cá rô phi Maoming Weiye, tỉnh Quảng Đông, Trung Quốc. Nhóm đối chứng được cho ăn thức ăn công thức dành cho cá rô phi, với thành phần gồm 30% bột đậu nành, 3% bột cá, 12% bột mì, 21,5% cám lúa mì, 30% bột hạt cải dầu, 1,5% Ca(H₂PO₄)₂ và 2% hỗn hợp vitamin và khoáng chất. Đậu faba được thu mua tại Vân Nam, ngâm trong nước lạnh trong 24 giờ, sau đó nghiền nhỏ và cho cá ăn trực tiếp. Thành phần dinh dưỡng chính của các loại thức ăn được trình bày trong Bảng 1.

Thí nghiệm cho ăn được thiết kế với hai nghiệm thức, gồm nhóm đối chứng (CG) và nhóm sử dụng đậu faba (FBG), mỗi nhóm có ba mẫu sinh học độc lập. Mỗi mẫu tương ứng với một đơn vị thí nghiệm riêng biệt là một ao bê tông, được phân bổ ngẫu nhiên vào nghiệm thức tương ứng và duy trì các điều kiện nuôi giống nhau trong suốt thời gian thí nghiệm, bao gồm mật độ thả, các thông số chất lượng nước và chế độ cho ăn. Như vậy, mỗi nghiệm thức CG và FBG đều bao gồm ba ao độc lập. Tổng cộng 300 cá rô phi khỏe mạnh, có khối lượng ban đầu 665 ± 34 g, được lựa chọn từ cùng một lứa giống và có kích thước tương đối đồng đều. Cá được nuôi trong các ao bê tông ngoài trời có kích thước 3 × 4 × 1 m, với mật độ 50 con/ao. Thí nghiệm cho ăn được tiến hành trong 80 ngày. Trong thời gian này, nhiệt độ nước dao động từ 27–31 °C, hàm lượng oxy hòa tan được duy trì trên 6 mg/L và pH nằm trong khoảng 6–7,5. Cá được cho ăn hai lần mỗi ngày, vào lúc 9:00 sáng và 18:00, với lượng thức ăn tương đương khoảng 3% khối lượng cơ thể.

Sau 80 ngày thí nghiệm cho ăn, cá được nhịn đói trong 24 giờ trước khi tiến hành lấy mẫu. Các cá thể được lựa chọn ngẫu nhiên bằng cách gắn cho mỗi con một thẻ nhận dạng riêng biệt, sau đó tạo các số ngẫu nhiên tương ứng bằng máy tạo số ngẫu nhiên hoặc bảng số để xác định số lượng cá cần lấy mẫu. Những cá thể được chọn lần lượt được bắt bằng lưới mềm nhằm hạn chế tổn thương và giảm thiểu sự xáo trộn đối với các cá thể còn lại. Cá sau đó được gây mê bằng dung dịch MS-222 ở nồng độ 400 mg/L cho đến khi mất ý thức, được xác định dựa trên việc không còn phản ứng của mang khi chạm vào. Trước khi lấy mẫu, cá được cân và đo chiều dài. Mô cơ lưng, nằm phía trên đường bên, được thu thập để phục vụ các phân tích về cấu trúc cơ bằng mẫu cơ tươi, mô học, hàm lượng collagen và transcriptome.

Tại các thời điểm 0, 40 và 80 ngày cho ăn, 10 cá thể thuộc mỗi nhóm được lựa chọn ngẫu nhiên để thu mẫu mô cơ lưng. Các mẫu mô được đông lạnh ngay lập tức trong nitơ lỏng, sau đó chuyển sang bảo quản ở −80 °C cho đến khi tiến hành phân tích RT-qPCR.

2.3. Đo lường hiệu suất tăng trưởng

Trọng lượng và chiều dài của từng con cá được đo, cùng với tổng số lượng cá. Tỷ lệ tăng trọng và tỷ lệ sống được tính toán bằng các công thức sau:

Tỷ lệ sống = N _t /N ₀  × 100 %.

N_t biểu thị số lượng cá sống sót trong mỗi nhóm tại thời điểm lấy mẫu 80 ngày và N₀ biểu thị số lượng cá trong mỗi nhóm thí nghiệm vào thời điểm bắt đầu thí nghiệm.

Tốc độ tăng trọng = (W _t -W ₀)/W₀.

Wt biểu thị trọng lượng cơ thể của cá trong mỗi nhóm tại thời điểm lấy mẫu 80 ngày và W0 biểu thị trọng lượng cơ thể ban đầu của cá trong mỗi nhóm khi bắt đầu thí nghiệm.

2.4. Đo lường các thông số kết cấu

Mô cơ lưng tươi được thu thập và phân tích bằng máy phân tích kết cấu CT3 (Brookfield Inc., Middleboro, USA) nhằm đánh giá các đặc tính kết cấu của cơ. Phân tích kết cấu tổng thể (TPA) được thực hiện với các thông số: giá trị nén mục tiêu 4,0 mm, tốc độ đầu dò 0,5 mm/s, đường kính đầu dò tròn 6 mm, độ dày mẫu cơ 5 mm, thời gian giữa hai lần nén 2 giây và tỷ lệ nén 25%.

Tại mỗi thời điểm lấy mẫu, 20 cá thể từ mỗi nhóm thí nghiệm được lựa chọn để tiến hành phân tích. Các chỉ tiêu kết cấu, bao gồm độ cứng, lực bám dính, độ bám dính, độ đàn hồi, độ kết dính, độ co giãn, chỉ số độ co giãn, độ dẻo, độ dai và chỉ số độ dai, được ghi nhận và tính toán bằng phần mềm đi kèm với máy phân tích kết cấu.

2.5. Quan sát cấu trúc vi mô của cơ

Một lượng mô cơ lưng thích hợp được ngâm trong dung dịch cố định Bouin (Phygene, Fuzhou, Trung Quốc) để cố định. Sau 24 giờ, mô được lấy ra và chuyển vào dung dịch ethanol 70%, sau đó được bảo quản ở 4°C để cắt lát trong tương lai. Mô cơ đã cố định được xử lý bằng quy trình khử nước theo nồng độ tăng dần bằng cách sử dụng ethanol với nồng độ từ 80% đến 100% (theo thể tích), tiếp theo là làm trong bằng xylene và nhúng trong paraffin trong 3 giờ. Các lát cắt có độ dày khoảng 8 μm được thu được bằng máy cắt lát Leica RM 2016 (Leica, Wetzlar, Đức). Sau khi nhuộm hematoxylin và eosin (HE), các lát cắt được dán kín bằng keo trung tính. Sau khi làm khô, chúng được quan sát và chụp ảnh dưới kính hiển vi quang học Nikon ECLIPSE 80i (Nikon, Tokyo Metropolis, Nhật Bản). Năm trường quan sát được chọn ngẫu nhiên cho mỗi lát cắt, và tổng cộng sáu mẫu được đo trong mỗi nhóm. Phần mềm phân tích hình ảnh ImageJ được sử dụng để phân tích 300 sợi cơ trên mỗi mẫu, và đường kính sợi cơ (phóng đại 20 lần) và mật độ sợi cơ (phóng đại 20 lần) đã được đo.

Đường kính sợi cơ được tính bằng công thức S = πr² ⁽trong đó S là diện tích và r là bán kính), với đường kính được xác định là 2r (tính bằng μm). Mật độ được đánh giá bằng cách đếm số lượng sợi cơ (sợi/mm²) trong một khu vực xác định.

2.6. Phân tích transcriptome

2.6.1. Chiết xuất và giải trình tự RNA (RNA-seq)

Ba con cá từ nhóm FBG và ba con cá từ nhóm CG được thu thập để giải trình tự transcriptome. Tổng RNA được chiết xuất bằng thuốc thử TRlzol (Life technologies, Carlsbad, USA) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Nồng độ và độ tinh khiết của RNA được đo bằng NanoDrop 2000 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA). Độ nguyên vẹn của RNA được đánh giá bằng bộ kit xét nghiệm RNA Nano 6000 trên hệ thống Agilent Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, Santa Clara, USA).

Quá trình xây dựng thư viện được bắt đầu sau khi các mẫu được định lượng. Các bước chính như sau: (1) mRNA của sinh vật nhân chuẩn được làm giàu bằng hạt từ tính với Oligo(dT); (2) mRNA được phân mảnh ngẫu nhiên bằng cách thêm dung dịch đệm phân mảnh; (3) sợi cDNA đầu tiên được tổng hợp bằng cách sử dụng mRNA làm khuôn mẫu, tiếp theo là tổng hợp cDNA mạch đôi và tinh chế; (4) cDNA mạch đôi đã được tinh chế được sửa chữa đầu cuối, thêm đuôi A và nối các điểm nối trình tự, tiếp theo là chọn lọc kích thước đoạn bằng hạt AMPure XP; (5) cuối cùng, thư viện cDNA được thu được sau khi làm giàu bằng PCR. Sau khi hoàn thành việc xây dựng thư viện, máy định lượng huỳnh quang Qubit 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA) được sử dụng để định lượng sơ bộ, đảm bảo nồng độ yêu cầu vượt quá 1 ng/μL. Sau đó, các đoạn chèn của thư viện được phân tích bằng hệ thống phân tích thông lượng cao Qsep400. Sau khi vượt qua đánh giá chất lượng, quá trình giải trình tự được thực hiện ở chế độ PE150 bằng nền tảng giải trình tự Illumina NovaSeq6000.

2.6.2. Phân tích và kiểm chứng dữ liệu

Các trình tự đọc sạch chất lượng cao đã được thu thập sau một loạt các quy trình kiểm soát chất lượng. Phần mềm HISAT2 được sử dụng để căn chỉnh các trình tự đọc sạch với bộ gen tham chiếu (Oreochromis_niloticus .O_niloticus_UMD_NMBU.genome.fa). Các trình tự đọc được căn chỉnh thành công với bộ gen tham chiếu được gọi là dữ liệu đã được ánh xạ. Dựa trên dữ liệu đã được ánh xạ này, các mẫu riêng lẻ được phân tích mức độ biểu hiện gen bằng phần mềm RSEM; mức độ biểu hiện gen được ước tính bằng số lượng trình tự được ánh xạ trên mỗi kilobase của bản phiên mã trên mỗi triệu. Phân tích biểu hiện khác biệt được thực hiện bằng phần mềm DESeq2.

Năm gen biểu hiện khác biệt (DEG) giữa nhóm CG và FBG được chọn ngẫu nhiên để thực hiện RT-qPCR nhằm xác nhận kết quả RNA-seq. Các mồi được thiết kế dựa trên trình tự gen từ dữ liệu transcriptome và được tổng hợp bởi Công ty Sinh học Thượng Hải Jinweizhi (Thượng Hải, Trung Quốc). Trình tự của các cặp mồi được sử dụng được trình bày trong Bảng 2. β -actin được sử dụng làm gen tham chiếu nội bộ. Hệ thống RT-qPCR 20,0 μL bao gồm 2× SYBR Green Prc Taq HS Premix (10 μL), cDNA (1 μL), Primer F (0,4 μL), Premix R (0,4 μL) và nước không chứa RNase (8,2 μL). Chương trình phản ứng như sau: 95 °C trong 30 giây; tiếp theo là 40 chu kỳ 95 °C trong 8 giây và 56 °C trong 30 giây. Mức độ biểu hiện tương đối của các gen mục tiêu được tính toán bằng phương pháp 2 ^-ΔΔCt, và ý nghĩa thống kê được đánh giá bằng phép kiểm định t (P  < 0,05).

2.7. Xác định tổng hàm lượng collagen

Hydroxyproline (HYP), một axit amin ổn định, chiếm khoảng 13,4% tổng thành phần axit amin của collagen. Do đó, HYP thường được sử dụng làm chỉ dấu sinh học để đánh giá hàm lượng collagen. Hàm lượng collagen được định lượng bằng bộ kit (Mã số A030–2-1; Viện Công nghệ Sinh học Nanjing Jiancheng, Nam Kinh, Trung Quốc) theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

2.8. Phân tích biểu hiện gen liên quan đến xơ cơ

Cá được chọn ngẫu nhiên từ nhóm đối chứng (CG) và nhóm đối chứng không đối chứng (FBG) vào các ngày 0, 40 và 80. Năm gen biểu hiện khác biệt liên quan đến xơ gan, bao gồm các gen xơ gan col1α1, comp, fibrosin và versican, cũng như gen chống xơ gan decorin, được chọn để phân tích dựa trên kết quả giải trình tự transcriptome. Các mồi được thiết kế bằng phần mềm PrimerPremier 6.0 và được tổng hợp bởi Công ty Sinh học Thượng Hải Jinweizhi (Shanghai Jinweizhi Biological Company, Thượng Hải, Trung Quốc). Trình tự của các cặp mồi được trình bày trong Bảng 2. Hệ thống RT-qPCR được sử dụng đã được mô tả trước đó trong phần trước.

2.9. Phân tích thống kê

Dữ liệu được phân tích bằng phần mềm SPSS Statistics for Windows (phiên bản 26.0). Kiểm định T được sử dụng để so sánh hiệu suất tăng trưởng, cấu trúc cơ, vi cấu trúc sợi cơ, hàm lượng collagen và biểu hiện gen tương đối giữa nhóm đối chứng (CG) và nhóm đối chứng (FBG) tại cùng một thời điểm lấy mẫu, cũng như giữa các thời điểm lấy mẫu khác nhau trong cùng một nhóm cho ăn. Kết quả được trình bày dưới dạng giá trị trung bình ± sai số chuẩn, với giá trị P nhỏ hơn 0,05 cho thấy ý nghĩa thống kê.

…Còn tiếp…

Theo Ning-xin Guo, Wen-bin Luo, Jin-hua Gao, Gazahegn-Wakjira Yadata, Xiao-li Yao, Zhi-chao Meng, Yan Zhao, Jin-liang Zhao

Nguồn: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2666566225000760

Biên dịch: Nguyễn Thị Quyên – Tôm Giống Gia Hoá Bình Minh

Đọc thêm:

• Phần 1: Đánh Giá Tác Động Của Việc Bổ Sung Lá Ổi (Psidium guajava) Lên Hiệu Suất Tăng Trưởng, Tình Trạng Chống Oxy Hóa Và Các Thông Số Huyết Học Của Cá Rô Phi (Oreochromis niloticus)
• Phần 2: Đánh Giá Tác Động Của Việc Bổ Sung Lá Ổi (Psidium guajava) Lên Hiệu Suất Tăng Trưởng, Tình Trạng Chống Oxy Hóa Và Các Thông Số Huyết Học Của Cá Rô Phi (Oreochromis niloticus)
• Nghiên Cứu Sò Lụa (Paratapes undulata) Trở Thành Giải Pháp Tự Nhiên Để Kiểm Soát Bệnh Vibriosis Trong Nuôi Cá Rô Phi